Devenind cu comuna Schizophyllum: Creați o cultură sterilă din ciupercile găsite: 3 pași (cu imagini)

2024 Autor: John Day | [email protected]. Modificat ultima dată: 2024-01-30 11:46

Acest instructiv este axat pe explicarea modului de creare a unei culturi sterile a ciupercilor Schizophyllum Commune (denumire comună Split Gill ciupercă) pe o cutie Petri folosind ciuperci găsite. Comuna Schizophyllum s-a dovedit a avea peste 28 000 de sexe, poate fi găsită pe toate continentele, cu excepția Antarcticii, și are capacitatea (ca și alte „ciuperci de putregai alb și maro”) de a degrada poluarea perturbatoare endocrină (materiale plastice, imitarea hormonilor petrochimici industriali, cum ar fi îngrășământul Atrazine, plastifiantul Bisfenol-A sau hormonul sintetic Dietilstilbestrol).

Voi trece în revistă tehnicile de identificare a ciupercilor sălbatice, cum să preparați o agri nutritivă din placa Petri și cum să folosiți ciupercile găsite pentru a crește o cultură sterilă izolată în cutia Petri. Alte instrumente din această serie trec peste tehnici precum identificarea genetică a ciupercilor, teste enzimatice simple pentru a testa capacitatea ciupercii de a descompune materialele plastice și poluarea care imită hormonii și modul de preparare a brânzei cu S. Commune.

Acest proiect a ieșit din munca de colaborare a lui Mary Maggic, Paula Pin și a mea în timpul unei rezidențe la HANGAR din Barcelona, Spania, toamna septembrie 2018. Pentru mai multe informații despre proiect, citiți pe ~~ sau săriți peste toate Bla Bla și mergeți direct la Step 1 pentru tutorial:)

Imaginile provin din Schizophyllum Commune Fanzine ~ fișierele pot fi descărcate gratuit aici

În timpul reședinței, cele trei obiective principale au fost:

1 ~ Cercetați și digerați literatura științifică despre comuna Schizophyllum și diversele sale interacțiuni cu hormoni și poluanți petrochimici care perturbă endocrinele. S. Commune este una dintre numeroasele ciuperci „putrezite albe și maronii” cu capacitatea de a descompune poluarea hormonală și endocrină care perturbă. Aceste ciuperci se hrănesc din copaci prin eliminarea enzimelor „lignocelulozice” din corpurile lor din rețea sau „micelii”, iar enzimele sunt capabile să descompună celuloza și lignina din care sunt compuși copacii. Datorită similitudinilor structurale dintre celuloză, lignină și hormoni EDS '/ atrazină, BPA, estradiol, dietilstilbestrol și nonilfenoli, enzimele „lignocelulozice” secretate de ciuperci pot, de asemenea, descompune o mare varietate de substanțe toxice. În plus, S. Commune produce polizaharide imunostimulatoare care sunt utile ca prevenitoare și tratamente pentru cancer (Aprobat în Japonia pentru tratamentul cancerelor de col uterin), poate spori proprietățile fitoestrogenice ale anumitor plante prin fermentare, poate fi utilizat în locul cheagului și lactobaciliusului în procesele de brânzeturi și produc enzime de dizolvare a cheagurilor de trombină (utile în tratarea trombozei). În mod ciudat, aceiași „beta-glucani” care pot fi extrasați cu apă clocotită ca tratamente împotriva cancerului și imunostimulanți, sunt folosiți și de industria petrolieră pentru a spori randamentul petrolului, legând S. Commune într-o buclă de feedback bizar la producerea perturbării endocrine petrochimice este capabil să se degradeze și să remedieze.

2 ~ Dezvoltați protocoale DIY și DIWO (faceți-o împreună cu alții) care simplifică aceste recipiente pentru lucrul cu EDC și ciuperci pentru a traduce cunoștințele științifice codificate într-un limbaj mai accesibil. Utilizați aceste recipiente pentru educație, pentru întrebări, pentru rezistență la colonizările moleculare și pentru a crea noi narațiuni despre devenirile multispeciei și mutageneza noastră colectivă.

3 ~ Provocați discursul cisheteronormativ, queerfobic dominant din jurul substanțelor chimice care afectează endocrinele (EDC). Pentru a cita bursa lui Malin Ah-King și Eva Hayward cu privire la aceste probleme, "Multe publicații de știri raportează aceste povești endocrine înspăimântătoare din curtile noastre. Într-un efort de a pune în prim plan aceste probleme - așa cum vom descrie în cele ce urmează, mass-media a pus în lumină o metamorfoză Frankenstein care amenință sexul și sexualitatea. În loc să abordeze numeroasele alte riscuri pentru sănătate asociate cu expunerea la toxice, cele mai senzaționale și polemice probleme stau în dezbatere și răspuns critic. și chiar moartea? Ce nervi culturali (dintre care mulți sunt globalizați), sunt declanșați? Și, pentru cei dintre noi cu preocupări feministe, cum reorientăm dezbaterea departe de esențialism, sexism și heteronormativitate? " (Sexe toxice).

Comuna Schizophyllum este o „ciupercă de putregai albă” unică, prin faptul că s-a constatat că are peste 28.000 de sexe genetice. Această adaptare, teoretică mulți, a permis incredibila diversitate genetică a acestei specii care există pe fiecare continent din întreaga lume, cu excepția Antarcticii. Am vrut să sărbătorim frumoasa multiplicitate sexuală a acestui organism ca un exemplu al ciudățeniei biologiei. Discursul dominant care înconjoară EDC în mass-media și chiar din partea activiștilor de mediu se concentrează în mare măsură pe narațiunile neștiințifice, conform cărora aceste molecule provoacă anumite sexualități sau sexe pe care societatea noastră le patologizează, le etichetează ca fiind non-normative și adesea încearcă să le elimine sau să le evite. Nu numai că focalizarea fobică și stranie a strigătelor publice despre EDC este ireal din punct de vedere științific (hormonii și perturbatorii endocrini nu îi fac pe oameni ciudați sau trans), dar ignoră toate efectele devastatoare ale realității pe care le putem lega de EDC: obezitatea, tulburări tiroidiene, anumite tipuri de cancer, printre alte riscuri pentru sănătate.

Pasul 1: Găsiți comuna Schizophyllum care trăiește în comunitatea dvs

Culturile sterile de laborator ale comunei Schizophyllum pot fi achiziționate pentru aproximativ 350 USD de la o bancă de cultură microbiologică, cum ar fi ATCC … motiv pentru care am optat pentru cultura din ciuperci sălbatice gratuit:)

Am avut-o ușor, pentru că citisem despre comuna Schizophyllum și am observat că crește într-o zi pe un copac din fața apartamentului meu. Dacă nu sunteți atât de norocoși să vă dați din greșeală în S. Commune din cartierul dvs., veți dori să mergeți într-o zonă împădurită pentru a căuta ciuperci „de tip braț” care cresc pe copaci de lemn de esență tare (copaci care par că nu fac prea bine) sau copaci căzuți. S. Commune este una dintre cele mai frecvente ciuperci existente în întreaga lume și poate fi găsită practic oriunde există lemn de esență tare pentru a crește.

Mushroomobserver.org oferă o descriere detaliată excelentă a locului și momentului în care este posibil să găsiți S. Commune, precum și cum să o identificați și cum să evitați „semenele similare” care ar putea duce la identificare greșită:

IDENTIFICARE: Comuna Schizophyllum este ușor identificată prin branhii despicate, păr dens și capac în formă de evantai. Capacul are 1-4,5 cm lățime și, de obicei, o formă de coajă sau ventilator cu o suprafață cenușie până la albicioasă. Basidiosporii sunt 5-7,5 × 2 -3 micrometri. O ciupercă similară cunoscută sub numele de „Crimpată branhie” Plicaturopsis crispa nu este la fel de răspândită.

HABITAT: Schizophyllum commune crește pe lemn de esență tare folosind enzime pentru degradarea ligninei și provoacă „putregai alb”. Deci, se găsește în majoritatea oricăror zone lemnoase. Poate fi găsit pe tot parcursul anului datorită capacității sale de a se usca, de a se rehidrata în condiții mai bune și apoi de a continua să se sporeze.

Această ciupercă poate fi parazită pe copaci cu diametru mic, care sunt supuși stresului altor factori, cum ar fi seceta.

ASEMĂNĂ: Plicaturopsis crispa sau „branhia încrețită” este similar cu branhia divizată. De asemenea, are un corp de fructe în formă de coajă / ventilator. Cu toate acestea, capacul este de culoare maro roșiatic sau maro galben, iar partea inferioară este foarte distinctivă. Are vene branșate, precum branhiile, care sunt mult diferite de branhiile divizate din comuna Schizophyllum. Branghiul sertizat este mai puțin comun, dar distinctiv atunci când este găsit."

Pasul 2: Realizați plăci de agar nutrienți pentru ca S. Commune să crească

Pentru a izola o cultură a comunei S. veți avea nevoie de câteva farfurii Petri umplute cu alimente pentru ciupercă. Extractul de malț Agar este un produs simplu de preparat pentru S. Commune, sau „mediu nutritiv” care poate fi realizat cu ingrediente ușor accesibile. Este, de asemenea, o sursă de hrană bună de utilizat atunci când se fac experimente de testare enzimatică cu S. Commune și alte ciuperci de putregai alb sau maro ~~ acest proces va fi acoperit într-un alt instructable.

NOTĂ LATERALĂ: Dacă ați avut probleme cu găsirea comunei S., există multe alte ciuperci din aceeași familie care pot fi cultivate folosind aceleași procese și sunt la fel de bune dacă nu mai bune la degradarea poluanților endocrini perturbatori. Coada de curcan (Trametes Versicolor) a fost găsită în multe studii care au analizat sute de ciuperci de putregai alb și maro ca fiind cei mai mari producători de enzime "lignocelulozice" care degradează poluarea petrochimică. Ciupercile de stridii sunt, de asemenea, foarte bune la acest lucru.

Îmi fac munca microbiologică într-un laborator comunitar de biologie numit BUGSS (Baltimore Underground Science Space) unde am acces la sticlărie, cântare digitale, cilindri graduați, o autoclavă (pentru sterilizarea prin căldură și presiune a mediilor) etc. a apărut în întreaga lume în ultimul deceniu, deci este posibil să doriți să verificați această listă pentru a vedea dacă există una lângă voi. Dacă nu aveți un laborator comunitar excelent ca acesta în zona dvs., va trebui să investiți în unele echipamente de bază pentru acest proces, cum ar fi:

1 ~ Un cântar digital pentru măsurarea precisă a ingredientelor

2 ~ O oală sub presiune pentru a vă steriliza materialele cu căldură și abur

3 ~ vase Petri, pot fi cumpărate online destul de ieftin, sticlă reutilizabilă sau plastic de unică folosință vor funcționa, dar reutilizabil este întotdeauna mai bun:)

4 ~ Unele articole din sticlă pentru amestecarea ingredientelor, sterilizarea și depozitarea în.

Dacă nu doriți să investiți în acest echipament, puteți găsi plăci de agar cu extract de malț pre-turnate pe care să le cumpărați pe site-uri web precum Amazon ~ va fi mai scump pe termen lung dacă intenționați să continuați să faceți lucrări microbiologice.

Există deja multe ghiduri grozave și videoclipuri YouTube despre cum să-ți faci propriile farfurii Petri cu substanțe nutritive acasă. Deci, mai degrabă decât să intru în detalii deosebite despre asta, voi face legătura doar cu un cuplu - și voi oferi rețeta pentru 2% extract de malț Agar, care este mediul nutritiv pe care îl veți folosi.

Freshcap Musrooms: Ghid despre cum să faci plăci de agar pentru cultivarea ciupercilor acasă

Mykoweb: Noțiuni introductive despre cultivarea ciupercilor

Fișa tehnică a extractului de malț Agar

2% Agar de extract de malț (MEA) ~~ Rețetă pentru 1 litru:

20g Extract de malț (aprovizionare obișnuită pentru fabricarea berii, poate fi cumpărat online)

15g Agar (agent de solidificare - acesta este folosit pentru a găti des, astfel încât să poată fi achiziționat online sau la unele magazine alimentare)

1 litru H20 (de obicei folosesc apă cu osmoză inversă care poate fi achiziționată în majoritatea magazinelor alimentare din ulcioare de galoane)

Această rețetă poate fi ușor modificată dacă doriți să faceți cantități mai mici. De multe ori fac doar 250 ml simultan, așa că ajung doar să folosesc 5 grame de extract de malț, 3,75 grame de agar și 250 ml de apă.

Pasul 3: Inoculați vasul Petri cu ciuperci

Ciuperca pe care o vedeți se numește „corpul fructificator”, este doar o mică parte a organismului. Majoritatea corpului său este ascuns în copac (sau în pământ), consumând lemnul. Această parte a ciupercii se numește miceliu. Pentru a cultiva corpul alb filamentos, tentacular, rizomatic, micelial al comunei Schizophyllum Commune, veți lua un eșantion de tulpină, îl veți steriliza și așeza pe plăcile MEA. Miceliul va crește din proba de miez sterilizată a tulpinilor de ciuperci și va coloniza vasul Petri, arătând ca un covor alb de bumbac.

O să ai nevoie:

• Farfuriile de extract de malț (MEA) pe care le-ați pregătit în pasul anterior
• 70% alcool izopropilic (alcool de frecare) și o sticlă de pulverizare
• Servețele de hârtie
• Bisturiu sau doar un tăietor de oțel inoxidabil va funcționa
• pensete metalice
• mănuși
• O flacără - folosesc o lampă cu alcool pentru sterilizarea instrumentelor, NonDisjunction are un tutorial minunat despre cum să faci una aici.
• Suprafață sterilă de tăiat (tocmai am folosit o cutie Petri sterilă pentru asta)
• Parafilm, un film de parafină folosit pentru a sigila vasele Petri - puteți utiliza doar bandă de mascare dacă nu aveți acest lucru

TEHNICA STERILĂ:

Principalul lucru pe care doriți să-l țineți cont atunci când încercați să utilizați tehnica sterilă este că bacteriile și sporii cad continuu în aer, deci doriți să vă păstrați vasele Petri acoperite cât mai mult posibil. Când ridicați capacele pentru a turna material sau inoculați, este întotdeauna cel mai bine să țineți capacul chiar deasupra vasului, permițându-vă să accesați interiorul orizontal, dar păstrând capacul deasupra vasului pentru a preveni căderea bacteriilor. sunt un conglomerat uriaș de organisme umane, bacteriene, fungice și alte organisme ~~ deși nu-l vedeți, sunteți înconjurat de un nor dens de microbi care se difuzează din corpul vostru. În loc să vă așezați doar pe suprafața pielii, micro-biomul dvs. se extinde în aer ~~ sooooooo, nu fluturați niciodată mâinile peste vasul Petri sau nu vă aplecați pe vasul deschis pentru a privi. Și purtați mănuși dacă le ai;)

CONFIGURAȚI-VĂ SPAȚIUL DE LUCRU SEMI-STERIL

Alegeți o suprafață de lucru neporoasă, liberă de resturi și junk. Pulverizați zona cu soluția de alcool izopropilic 70% și ștergeți-o cu un prosop de hârtie. Așezați flacăra în centrul zonei de lucru și aprindeți-o. Veți dori să lucrați cât mai aproape de flacără, deoarece creează un mic câmp steril în jurul său. Așezați plăcile MEA pe o parte și proba de ciuperci pe o suprafață de tăiere sterilă pe cealaltă parte. În mod normal, folosesc o cutie Petri sterilă ca suprafață sterilă de tăiere, precum și un suport de scule. Turnați niște alcool izopropilic într-un pahar mic - îl veți folosi pentru a vă steriliza lama și penseta în timp ce lucrați.

* ¡~ INOCULAȚI ~! *

Înainte de a face ceva, sterilizați-vă lama și penseta, scufundându-le în alch izopropil și apoi țineți-le puțin peste flacără. După sterilizare, așezați-le pe suprafața sterilă de tăiere dacă le așezați. Cu ajutorul pensetelor, țineți tija de ciupercă nemișcată și tăiați o bucată de capătul acesteia. Luați această bucată și tăiați toate părțile, astfel încât să ajungeți cu un mic cub de miez de ciupercă, cu toate suprafețele exterioare îndepărtate. Acest lucru vă ajută să scăpați de toți ceilalți microbi care trăiesc pe ciupercă, astfel încât să nu vă contamineze cultura. Apoi înmuiați miezul tulpinii în izopropil timp de aproximativ 30 de secunde, scoateți-l și lăsați-l să se usuce în câmpul steril al flăcării (nu folosiți flacăra pentru ao usca, aceasta va ucide ciuperca). Flacăra sterilizează-ți din nou penseta în timp ce aștepți să se usuce miezul tijei. Apoi, pur și simplu ridicați capacul uneia dintre plăcile MEA suficient cât să glisați penseta din lateral și folosiți penseta sterilizată pentru a plasa miezul tijei în centrul plăcii. Sigilați placa cu parafilm și, în următoarele săptămâni, ar trebui să vedeți miceliul S. Commune colonizând placa.

De obicei, fac mai multe plăci atunci când lucrez cu probe sălbatice, astfel încât, dacă primesc contaminare, sunt mai probabil să am cel puțin o cultură curată.